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pcr加什么反应物

简述信息一览:

PCR反应中各种添加剂的作用

1、BUFFER 作用主要是稳定PCR过程中的PH。用于PCR的标准级冲液的主要成分,其中二价镁离子的存在与否至关重要。镁离子浓度可直接关系DNA聚合敌的活性和DNA双链的解链温度,因此对反应的特异性及产证有显著影响。

2、一些共溶剂和添加剂能够降低错误率,提高扩增效率。共溶剂有甲酰胺(25-10%,v/v)、二甲基亚砜(最高可到15%,v/v)及甘油(1%-10%,v/v)。添加剂包括氯化四甲铵、谷氨酸钾、硫酸铵。

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(图片来源网络,侵删)

3、促进核酸骨架的形成。Mgcl2和硫酸镁在pcr的作用主要是促进核酸骨架的形成,影响聚合酶的4活性。Mgcl2浓度过高会降低扩增特异性,浓度过低影响扩增产量。

4、作用:PCR缓冲液就是给PCR反应提供的一个最适酶催反应条件。例如缓冲液中的镁离子在酶催化过程中,结合到酶-底物结合体上,从而使催化反应的活化能更加降低。 使得反应能够进行。

pcr技术中使用的聚合酶是

首先,我们来说一下PCR技术所用的酶。所用的酶是Taq DNA聚合酶,现在已知的所有的DNA聚合酶在使单个的脱氧核苷酸聚合的时候都有一个共性,它无法从头开始,只能在一段序列的末尾续接。

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(图片来源网络,侵删)

PCR最初使用的DNA聚合酶是大肠杆菌DNA聚合酶 I的Klenow片段。

热稳定的DNA聚合酶 因为PCR技术所要求的温度是90℃左右,此时用热稳定的聚合酶就可以了,这种酶也称Taq酶,这是技术上的知识。没有什么特别的原因。

PCR技术所需要的特殊的酶是:耐高温的DNA聚合酶,比如TaqDNA聚合酶、pfu酶等。它和DNA自我***所需要的酶的区别:能够耐高温;无校对活性,保真度较低。引物是:人工合成的寡核苷酸片段DNA。

单纯的PCR技术只需要一种酶——TaqDNA聚合酶。

pcr扩增所需的原料

pcr需要的原料有:物(PCR引物为DNA片段,细胞内DNA***的引物为一段RNA链)、酶、dNTP、模板和缓冲液。

参加PCR反应的物质主要有五种即:引物、酶、dNTP、模板和缓冲液。引物有多种设计方法,由PCR在实验中的目的决定,但基本原则相同。PCR所用的酶主要有两种来源:Taq和Pfu,分别来自两种不同的噬热菌。

目的基因、四种脱氧核苷酸。作为PCR的模板,是DNA片段,可以是已知序列的基因或其他DNA片段。作为合成DNA的原料,包括腺嘌呤脱氧核苷酸、鸟嘌呤脱氧核苷酸、胞嘧啶脱氧核苷酸和胸腺嘧啶脱氧核苷酸。

PCR技术的原料也受到样本特性的限制。DNA模板通常需是高质量、高纯度的标本,引物应与样品中目标序列定位相一致,反应体系的缓冲液和抑制剂成分应该在样品中合适。

关于pcr中添加的有机物,以及pcr加什么反应物的相关信息分享结束,感谢你的耐心阅读,希望对你有所帮助。